Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
➤ Gửi thông báo lỗi ⚠️ Báo cáo tài liệu vi phạmNội dung chi tiết: Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
Phưong ThịLuận văn Thạc sĩ khoaĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITROỊỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊNPhqơng Thị HàXÁC ĐỊNH KIẾU GEN VIRUS VIÊM GAN c TRONG HUYẾT THA Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR ANH BỆNH NHÂN VIÊM GAN c BẰNG KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ RT - PCRChuyên ngành : Vi sinh vật học Mà số60 42 40LUẬN VĂN THẠC sĩ KHOA HỌCNGƯỜI HƯỚNG DÁN KHOA HỌC:Ts.Bs Nguyền Vàn TiênHÀ NỘI - 20121ĐẶT VẪN ĐỀBệnh viêm gan do virut c là có ánh hưởng lớn đêh tình trạng sức khỏe của con người trên toàn thế Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR giới, bởi vì sau khi bị nhiêm virus viêm gan c cấp tính thì có khoáng 70-90% bệnh nhân chuyên từ giai đoạn câp tính sang giai đoạn mạn tính và có tớiLuận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
20-25% trong số bệnh nhân này sẻ chuyên qua giai đoạn xơ gan và ung thư gan [17,33,36]. Theo tô chức y tẽ thẽ giới có khoảng 170 triệu người nhiềm virPhưong ThịLuận văn Thạc sĩ khoaĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITROỊỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊNPhqơng Thị HàXÁC ĐỊNH KIẾU GEN VIRUS VIÊM GAN c TRONG HUYẾT THA Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR ệ người bình thường bị nhiêm căn bệnh này là khoáng 6% [42], xem như là thuộc nhóm các quõc gia có ti lệ nhièm viêm gan c cao trên thế giới [13,42].HCV là một virut có bộ gen là ARN, trong chu kỳ nhân đôi của virut phải sử dụng men ARN polymerase, mà men này không có khâ năng sửa sai trong quá trình Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR tống hợp ARN, từ đó làm cho bộ gen của virus rất đa dạng nên người ta đà phân virus thành nhiều loại (type) khác nhau[7,50] và con đường lây nhiễm chLuận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
ù yêu cùa HCV là qua đường máu. Sau khi xác định được người dương tính với anti-HCV, Bác sĩ trước khi cho chì đinh điều trị phải làm xét nghiệm hai yếPhưong ThịLuận văn Thạc sĩ khoaĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITROỊỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊNPhqơng Thị HàXÁC ĐỊNH KIẾU GEN VIRUS VIÊM GAN c TRONG HUYẾT THA Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR kiẽu gen cùa siêu vi gây viêm gan c (HCV Genotypes) [1,37]. Kiêu gen HCV phân bô khác nhau tùy theo vùng địa lý, mòi châu lục hay mòi nước có những kiẽu gen nối trội riêng [41,43]. Hiện nay trên thế giới đà biẽt được 6 loại genotypes và khoảng hơn 50 subtype (dưới type)[3,7], ở Việt Nam phỗ biên gen Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR otypes 1,2, và 6, kiêu genotype 3 hiếm gặp [1,50].Đê xác định được genotypes HCV thì ngày nay với sự phát triển của công nghệ sinh học, đặc biệt là chLuận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
uyên ngành công nghệ sinh học phân từ đã phát minh nhiều kỳ thuật đê xác định kiẽu gen HCV. Trên thẽ giới có nhiêu công ty: Bayer, Beckman Coulter, QIPhưong ThịLuận văn Thạc sĩ khoaĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITROỊỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊNPhqơng Thị HàXÁC ĐỊNH KIẾU GEN VIRUS VIÊM GAN c TRONG HUYẾT THA Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR p dụng rộng rãi. Ờ Việt Nam phố biẽn hai kỳ thuật xác định genotypesHCV: Real-time PCR (RT-PCR) và kỳ thuật giài trình tự gen (sequencing). Kỳ thuật Sequencing trong chuãn đoán có nhiêu tính ưu việt trong việc xác định kiẽu gen là sự chính xác cao, tránh được những nhầm lần trên cùng một type hoặc s Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR ubtype nhung phương pháp này cân có các máy móc trang thiết bị hiện đại và điều kiện kỳ thuật cao nên gia thành cao chù yẽu được thực hiện tại các truLuận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
ng tâm nghiên cứu. Kỳ thuật RT-PCR được tiẽn hành ở tãt cả các phòng thí nghiệm PCR do dè thực hiện không đòi hòi máy móc trang thiết bị và kỳ thuật cPhưong ThịLuận văn Thạc sĩ khoaĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITROỊỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊNPhqơng Thị HàXÁC ĐỊNH KIẾU GEN VIRUS VIÊM GAN c TRONG HUYẾT THA Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR à type6. Với mục đích khuyên cáo bệnh nhân lựa chọn đúng phương pháp xác định genotype, vì vậy tôi chọn đê tài: “Xdc định kiêu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c báng kỳ thuật sinh học phân tử RT-PCR”, với nhừng mục tiêu như sau :ỉ) Xác định li lệ người mang kiẽu gen HCVbÒng Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR phương pháp RT-PCR SỪ dụng Taqman probe.2) Xác định lại kiẽu gen type 1 bỏng phương pháp giòi trình lự gen (Sequencing) trên đoạn gen NS5B.Chqotag 1:Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
TỔNG QUAN TÀI LIỆU1.1.Đặc điếm sinh học virut viêm gan c (HCV)1.1.ỉ. Lịch sử nghiên cứu và phân loạiVào năm 1970, Harvey J.AIter Trưởng khoa nhiêm trPhưong ThịLuận văn Thạc sĩ khoaĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITROỊỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊNPhqơng Thị HàXÁC ĐỊNH KIẾU GEN VIRUS VIÊM GAN c TRONG HUYẾT THA Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR g không phài là B và được đặt tên là virut không A-không B.Mười bảy năm sau (năm 1987) Michael Houghton, Qui-lim Choo và tập đoàn, Gorge K dung sinh học phân từ định clon đẽ định tính virus không A không B , năm 1989 đà xác định virut không A không B có tên chính thức là virut viêm gan c và được côn Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR g bõ bâng 2 bài trẽn báo Scỉence[7J.Virus viêm gan c ( Hepatitis c virus - HCV) thuộc nhóm IV (+SSARN) virus ARN. Họ Flaviridae, cùng họ với virus DenLuận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
gue, Flavivirus West Nile, virus tiêu chày ở bò ( Bovine viral diarrhea - BVDV). Thuộc loài Hepacivirus[4,8,9].Virut Viêm gan c hiện nay được xem là nPhưong ThịLuận văn Thạc sĩ khoaĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITROỊỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊNPhqơng Thị HàXÁC ĐỊNH KIẾU GEN VIRUS VIÊM GAN c TRONG HUYẾT THA Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR c là loại virut hướng gan dưới kính hiên vi điện lừ người phát hiện HCV có hình câu, hình đa diện hoặc hình que kích thước nhỏ (Hình 1.1).Hình 1.1 Hình thái cùa HCV dơỊỚi kính hiến vi điện tửVe cấu trúc của virut viêm gan c bao gồm lõi ARN, nhân core, gai glycoprotein và màng vỏ (Hình 1.2).Kích thướ Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR c khoáng 60nmHình 1.2. Câu trúc cúa virut viêm gan c1.1.3.Genome HCVGenome cùa HCV có một lỏi chứa vật liệu di truyền là một sợi ARN có tính phân cựcLuận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR
dương, bao quanh bởi một màng protein có chức năng báo vệ tạo hình đa diện đêu và gói lại bời màng lipid từ nguồn cùa tế bào gan, kích thước cùa một cPhưong ThịLuận văn Thạc sĩ khoaĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITROỊỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊNPhqơng Thị HàXÁC ĐỊNH KIẾU GEN VIRUS VIÊM GAN c TRONG HUYẾT THA Luận văn thạc sĩ xác định kiểu gen virus viêm gan c trong huyết thanh bệnh nhân viêm gan c bằng kỹ thuật sinh học phân tử RT PCR hông tin (mARN) truyền đạt thông tin di truyền cho protein của virut [17,40,47].Tỗ chức Genome của HCV được chia làm hai vùngPhưong ThịLuận văn Thạc sĩ khoaĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITROỊỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC Tự NHIÊNPhqơng Thị HàXÁC ĐỊNH KIẾU GEN VIRUS VIÊM GAN c TRONG HUYẾT THAGọi ngay
Chat zalo
Facebook