Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
➤ Gửi thông báo lỗi ⚠️ Báo cáo tài liệu vi phạmNội dung chi tiết: Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
Chương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồ Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 khác nhau của các chà't cần tách trong hai pha: pha cố định và pha chuyên dộng. Pha cố định thường là rán, hoộc bấn rắn, hay dạng gel; còn phu chuyên dộng là lỏng hoặc khí.Tuỳ theo cấu tạo của các pha hày kiểu thiết kế hệ thông sắc ký mà có thể có các cách phân loại khác nhau: nh.ư sắc ký bản mỏng, Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 sắc ký lọc gel, sắc ký trao đổi ion, sác ký ái lực, sắc ký lỏng cao ốp, sắc ký đâo pha, sắc ký tương Lác kỵ nước,...Các chất cần tách sẻ được đưa vàoGiáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
pha cô' định, khi cho pha chuyên động chạy qua thì tuỳ thuộc khả nống giữ lại của pha cố định và khả nàng kéo đi cúa pha chuyển động đối với các châ'Chương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồ Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 c ký thành hai nhóm lớn là: sắc ký phôn tách (partition chromatography) và sắc ký hấp thụ (adsorption chromatography). Trong đó, sác ký phản tách là muốn chỉ nhừng loại sắc ký mà người ta sủ dụng’các pha cô' định như giấy, bản mỏng silicagel, trong đó các loại nguyên iiộu này không tó sự phần bô' ha Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 y tương tảc của chất cần tách với pha cố dịnh, sự phân tách các chất thực tế phụ thuộc vào hai pha lỏng, một bám vào giá cố định và một chuyển động. CGiáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
òn với sắc ký hap thụ thì các chất cần tách thể hiện sự hấp thụ hay tương tác với pha cô định.'■■■' ■! ••• 'Nếu ta xem hệ eố phân bô' K. của một chất Chương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồ Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 ách riêng các chất A, B, c,i.. thông qua hệ thống sắc ký thì người ta phải chọn pha cố định và pha chuyên động sao cho Ka* Kb * Kv- Khi các giá trị này càng khác nhau trong hệ khống sác ký sử dụng thì việc tách nông' chúng càng rõ TỘt. :Trong khuôn khổ giáo trình này, chúng tôi chỉ giới thiệu một sô Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 '420phương pháp sác ký hiện đang được sử dụng phổ biến nhất trong các phân tích hoá sinh. . c. . . ......4,2.SÁC KÝ BÀN MỎNG4.2.1.Nguyên tắc của sắc kGiáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
ý lớp mỏng. Sắc ký .lớp mỏng (SKLM) bao gốm lốp gcl mỏng tráng trên bề một kính, hoặc nhôm, là pha cò định và hệ thông dung môi hay pha chuyển dộng đưChương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồ Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 t polyphenol, carotenoid,...4.2.2,Các bước chinh của sắc ký láp mỏngChuẩn bị bản gel:Gel dùng trong SKLM thường là gel silica, gel được hoà vào nước cất và tráng lên bấn sắc ký một lớp khoảng 1 - 2 mm, sau đó sấy khô ỏ 1ÒO°€Ì. Hiện nay các bản gel sắc ký thường được bán sần.Chấm mẫu:' Mẫu được chuẩn Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 bị trong dung môi thích hợp (nhự ethanol) và có nồng dộ xác định. Dụng bút chì vạch nhẹ một dường lên bản sắc ký và đường này chính là vạch xuất phátGiáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
của mẫu. Tiếp tục dùng bút chì đánh dấu các vị trí chấm các mẫu theo thí nghiệm đật ra. Sau đó dùng pipet loại nhô hoặc dùng ông chấm sắc ký có chia Chương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồ Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 g nhỏ càng tốt (có thể chấm và chờ mặu khô để chấm bố sung).• ,J Chạy sắc hý: i: I : ụHình 4.1 minh hoạ các bưởc chính của quá trình sác ký lóp mỏng.• Các bản gel silica sau khi chấm mẫu được đặt vào hệ thông bình sác ký có nắp đậy; trong đó có chứa dung môi hữu cơ. Mức dung môi luôn dược giữ thấp h Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 ơn vạch xuất phất cửa mầu. Dung môi sẽ theo lớp gel để chạy ngược lên và mang theo các chất cần phân tích. Tốc độ di chuyến của các chất cần phân táchGiáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
tuỳ thuộc vào mức độ hoà tan cúa chúng trong hệ dung môi lựa chọn, và khối lượng phân tử của chất cần tách. Khi vạch dung môi chạy đến gần mép trên cChương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồ Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 ơng tự, tuỳ thuộc vào sự tách bạch giữa cấc mẫu quan tâm.A. Chấm mầu; B. Cho dung mởì chạy qua; c. Kết thúc quá trình cho dung môi chạy qua; 0. Hiển thị kốt quả chạy sắc ký và tính loán hệ số Rf.Hiển thị kết quả sắc ký:.Việc nhận ra các hợp chất sau SKLM thường cần quá trình hiển thị chúng và dược t Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 hực hiện bằng một : sô" cách khác nhau. Thông thường, sau khi chạy, người ta có thể xử lý bản sác ký bảng H2SO4 dặc và sấy ỏ 100ŨC trong vài phút, cácGiáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
chất hữu cơ sẽ xuất hiên dưới jdạng các vệt màu đen. Người ta cung có thể nhuộm bằng hơi iôt, cụ thề' là ú bản sác ký trong buồng sác ký không chứa dChương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồ Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 hiển thị kết quả phân tách các chất trên bản sắc ký bằng các phản ứng măú đặc trưng kèm theo việc so sánh với chất chuẩn, ví dụ với các đường, người ta cho nhuộm bằng aniline phlatate; còn với các acid amih thì nhuộm bằng thuốc thử ninhydrin.•'' ‘Khi việc phân tảch giữa các chất trong hỗn hợp không Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 rõ ràng, người ta có thể thạy đổi thành phần và/hoặc tỷ lệ của cấc dung môitrong hỗn hợp dung môi sắc ký. Việc bổ sung cốc chất không phân cực cũng nGiáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
hư tàng tỷ lệ của chúng aè tạo điều kiện cho các chất ít phân cực chạy nhanh hdn khỏi vạch xuất phát và ngược lại.Phân tích kết quả:Trong SKLM người tChương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồ Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 i chuyến được khỏi vệt xuất phát trôn khoáng chất mà dung môi di chuyển được. Trong hình 4.1 nêu trên, hộ sô' Rf cùa chất B và c tương ứng sê là w/y và x/y. Các chất có cùng bản châ't, giống nhau về kích thưốc hay KLPT thì sê có Rr càng gần nhau.Trong một sô' trường họp, người ta có thể dùng sác ký Giáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2 hai chiểu đô'i với các nhóm hợp chát khố tách khói nhau. Trong đó, chiều thứ hai, sự di chuyển dung môi sè vuông góc vởi chiều thứ nhất và thường ngườGiáo trình hóa sinh học thực nghiệm phần 2
i ta cũng thay đổi hộ dung mỏi khi chạy sác ký chiều thử hai.4.3. SẮC KÝ LỌC GEL4.3.1.Nguyên tắc của sắc kỷ lọc gelChương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồ Chương 4PHÂN TÁCH CÃC CHẤT BÀNG SẮC KÝ4.1.NGUYÊN TẮC CHUNG CỦA CÁC PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝSắc ký là phương pháp phân tách các chất dựa trên hệ sô' phân bồGọi ngay
Chat zalo
Facebook